<optgroup id="wkwgi"><div id="wkwgi"></div></optgroup>
<center id="wkwgi"></center>
<center id="wkwgi"><wbr id="wkwgi"></wbr></center> <optgroup id="wkwgi"><wbr id="wkwgi"></wbr></optgroup><code id="wkwgi"></code>
<center id="wkwgi"><div id="wkwgi"></div></center>
<optgroup id="wkwgi"><wbr id="wkwgi"></wbr></optgroup><center id="wkwgi"><wbr id="wkwgi"></wbr></center>
<center id="wkwgi"></center>
歡迎來到上海遠慕生物科技有限公司官方網站!
021-50760790

遠慕實驗:WB 上樣前如何制樣?

2021-08-26 11:06 作者:洛辰 來源:上海遠慕生物試劑
WB 是實驗室常見實驗之一,蛋白定量后,上樣之前,還需要哪些步驟制樣呢?

1. 蛋白含量測定后,遠慕建議大家把各個樣品稀釋到某一固定濃度(稀釋可使用 PBS,水或裂解液),等體積等質量上樣,計算上樣體積時需包含 loading buffer 的體積。

例如:把所有蛋白濃度都稀釋到 2ug/ul,然后與 2Xloading buffer 1:1 混合后,濃度成為 1ug/ul,建議上樣 20-30ul 即可。

2. 與 loading buffer 混勻后,要將樣品在沸水中煮 3-5 分鐘,使蛋白充分變性。也可使用 PCR 儀 95°加熱 5 分鐘。

PS:煮沸并非必須步驟,有些蛋白僅需 70℃ 煮或無需煮沸,具體請參照抗體要求操作。

3. 煮沸后在冰上靜置少許時間后進行低速離心,即可上樣。剩余樣品建議分裝后保存,樣品可以在 4℃ 冰箱短時間保存,也可以在-20 或-80℃ 保存,解凍后可重新煮沸上樣。

PS:樣品凍存時間過長或反復凍融會使蛋白質的抗原特性改變,故推薦大家使用遠慕生物超快速柱式法蛋白提取試劑盒,僅需幾分鐘就可完成總蛋白制備,再也不用擔心樣品質量不好啦!

SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳中樣品為什么要加 loading buffer?

loading buffer 的功能,第一,含有指示劑溴酚藍和二甲苯氰 FF 起到指示的作用,顯示電泳的進程,以便我們適時終止電泳;第二,成分中的甘油可以加大樣品密度,使樣品密度大于 Tris   或者其他緩沖液,從而沉降到點樣孔中,防止樣品飄出點樣孔;第三,loading buffer 中 SDS 是比較強的陰離子表面活性劑,與蛋白質表面結合,覆蓋蛋白質本身的電荷性質,使之表面帶負電荷。SDS 還可以破壞維持蛋白質高級結構的重要因素--疏水鍵,使蛋白質解構。2-ME 和 DTT 是比較強的還原劑,可以打開蛋白質分子內和分子間的二硫鍵, 使蛋白質亞基分離。

上樣之前煮沸的目的是什么?

煮沸樣品的目的是為了更好地將蛋白質的高級結構打開。在溫度高時,一方面維持蛋白質高級結構的各種作用力減弱,另一方面促進 SDS 的電荷覆蓋和疏水鍵打開作用。通過上樣 buffer 和加熱的處理,蛋白樣品呈現帶負電荷的長鏈(還原電泳),在電泳時的分子篩效應使得泳動只和蛋白質大小有關(也就是表觀分子量),與蛋白形狀無關。
收縮
QQ咨詢
  • 標準品
電話咨詢
  • 銷售一:18321664727
  • 銷售二:13310162040
  • 銷售三:18001933641
郵箱咨詢
  • [email protected]
国产 中文 亚洲 日韩 欧美_成年片色大黄全免费网址_国产在线高清精品二区_porno xxxxvideos